余波¹ , 罗永成² , 马永兵³ , 徐景峨¹ , 周思旋¹ , 杨莉¹ , 史开志¹

1贵州省畜牧兽医研究所, 贵阳, 550005
2贵州省水产技术推广站, 贵阳, 550001
3贵阳市水产技术推广站, 贵阳, 550004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 151 篇   
收稿日期: 2014年08月14日    接受日期: 2014年09月18日

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根据GenBank中致病性嗜水气单胞菌特异性的气溶素基因序列，设计1对引物，利用普通PCR技术扩增获得hlyA基因片段，并克隆到pMD-18T载体上作为阳性标准品。通过对SYBR Green I荧光定量PCR反应条件的优化，建立了快速检测致病性嗜水气单胞菌的SYBR Green I荧光定量诊断方法，以此为基础研制出试剂盒。试剂盒扩增产物的熔解曲线分析只出现1个单特异峰，无引物二聚体，对非致病性嗜水气单胞菌、弗氏柠檬酸杆菌、迟缓爱德华、柱状黄杆菌均无阳性信号扩增，重复性好，灵敏度可达1.0×10^１拷贝/µL。结果表明研制的致病性嗜水气单胞菌SYBR Green I 实时荧光定量PCR试剂盒具有特异、灵敏、快速、重复性好，适合于大鲵临床样品的检测。

致病性嗜水气单胞菌；荧光定量PCR；气溶素基因