施李鸣¹ , 陆群凤¹ , 杨彦彦¹ , 商巾杰⁴ , 陈保善^1,2,3

1广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005
2亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 南宁, 530005
3微生物及植物遗传工程教育部重点实验室, 南宁, 530005
4南京师范大学生命科学院, 南京, 210042
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 157 篇   
收稿日期: 2014年09月01日    接受日期: 2014年09月29日

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双分子荧光互补技术近年来已广泛应用于研究体内蛋白质相互作用。为建立适合于板栗疫病菌的体内蛋白质相互作用检测体系，本研究以质粒pCPXHY₂和pCPXG418为骨架，构建了由板栗疫病菌pgd启动子控制的、以增强型黄色荧光蛋白EYFP为报告基因和以潮霉素和G418抗性为选择标记的双质粒系统pCPXHY₂N155和pCPXG418C156。质粒pCPXHY₂N155携带EYFP的1~155位氨基酸残基的编码序列，pCPXG418C156携带EYFP基因的156~239位氨基酸残基的编码序列。为验证该质粒系统的有效性，将板栗疫病菌异质三联体G蛋白的β和γ亚基基因分别与pCPXHY₂N155上的N155和pCPXG418C156上的C156相连，获得重组质粒pCPXHY₂N155β和pCPXG418C156γ。将这两个重组质粒共转化板栗疫病菌野生型菌株EP155，在转化株中观察到明显的黄色荧光，表明Gβ和Gγ在细胞中发生了相互作用。本研究所构建的双分子荧光互补系统，为今后研究板栗疫病菌分子相互作用提供了新的技术手段。

板栗疫病菌；黄色荧光蛋白；双分子荧光互补系统；蛋白互作