王祥^1,2 , 张秀春² , 余乃通² , 周朋^1,2 , 梁洁^2,3 , 刘志昕²

1 海南大学农学院, 海口, 570228; 2中国热带农业科学院生物技术研究所, 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室, 海口, 571101; 3海南大学环境与植物保护学院, 海口, 570228
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基因组学与应用生物学, 2014 年, 第 33卷, 第 186 篇   
收稿日期: 2014年09月04日    接受日期: 2014年09月25日

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分别用两对引物PCR扩增BBTV cp、BBTV mp片段，混合各自PCR产物进行熔化退火可得到1/4两端含有EcoR I和BamH I的PCR产物，分别克隆到酵母双杂交系统的pGBKT7诱饵载体中，并成功获得pGBKT7-cp和pGBKT7-mp。将重组质粒导入酵母Y2H菌株，转化成功后进行诱饵载体的自激活验证及毒性验证。结果表明，获得了正确的BBTV-cp和BBTV-mp基因片段，并成功克隆到pGBKT7诱饵载体中，同时在SD/-Trp营养缺陷平板上转化有诱饵载体的Y2H生长良好，说明诱饵载体的表达产物对酵母细胞无毒性，对报告基因也无自激活作用，最后自激活验证确定了pGBKT7-cp和pGBKT7-mp可用于该系统的互作蛋白筛选，为下一步利用酵母双杂交系统检测与CP、MP蛋白相互作用的寄主蛋白奠定基础。

香蕉束顶病毒；酵母双杂交；诱饵载体；构建；自激活