高炳淼¹ , 刘云海¹ , 彭超² , 魏娜¹ , 张俊清¹

1海南医学院药学院, 海南省热带药用植物研究开发重点实验室, 海口, 71199; 2深圳华大基因研究院, 深圳, 518083
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 53 篇   
收稿日期: 2015年01月01日    接受日期: 2015年01月30日

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 人工设计合成芋螺毒素基因MrVIB来构建表达载体pET32a/Trx-EK-MrVIB，将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS进行诱导表达。菌体经超声破碎后利用Ni-NTA琼脂糖柱进行亲和层析纯化融合蛋白，SDS-PAGE电泳分析融合蛋白表达。结果表明融合表达载体pET32a/Trx-EK-MrVIB经PCR扩增和测序鉴定具有正确的开放阅读框。SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达，经一步亲和层析获得纯度大于90%的融合芋螺毒素达73.6 mg/L。本文成功构建了融合表达载体pET32a/Trx-EK-MrVIB，融合芋螺毒素Trx-EK-MrVIB在大肠杆菌中获得高效可溶性表达。

芋螺毒素；大肠杆菌；基因工程；融合表达；亲和层析