王宇¹ , 董旋^1,2 , 赵德刚^1,2

1贵州大学农业生物工程研究院/生命科学学院, 山地植物资源保护与种质创新省部共建教育部重点实验室,贵阳, 550025; 2贵州大学绿色农药与农业生物工程国家重点实验室培育基地, 贵阳, 550025
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基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 142 篇   
收稿日期: 2015年03月03日    接受日期: 2015年03月31日

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 根据本实验室建立的杜仲转录组数据库提供的序列信息设计引物，以杜仲含胶组织叶和皮为材料提取总mRNA，采用RACE技术克隆了5’端700 bp和3’端600 bp cDNA片段，连接至pGEM-T载体，经测序拼接后获得全长1 075 bp的杜仲橡胶延长因子基因(Eucommia ulmoides rubber elongation factor, EuREF) cDNA序列，其中开放阅读框678 bp，共编码225个氨基酸残基。在NCBI中blastp比对，EuREF与葡萄、蓖麻REF序列同源性分别为42% ，41% ；预测的蛋白质EuREF氨基酸序列经blastp 比对，显示该预测蛋白质序列属于REF 超家族。本研究首次克隆杜仲的橡胶延长因子基因，构建了EuREF 基因的植物表达载体pSH-35S-EuREF，采用农杆菌介导法遗传转化烟草，经PCR检测和GUS组织染色，获得含转基因烟草43株，移栽生长四个月的转基因烟草在表型上与野生型在叶片长宽比与叶片数量上有明显差异。

 

 

杜仲；橡胶延长因子；基因克隆