杨文君^1,2 , 余乃通¹ , 张雨良¹ , 王健华¹ , 谢慧敏¹ , 刘锋¹ , 刘志昕¹

1中国热带农业科学院热带生物技术研究所, 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室, 海口, 571101; 2雅安职业技术学院, 雅安, 625000
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基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 130 篇   
收稿日期: 2015年02月03日    接受日期: 2015年02月27日

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由甘蔗黄叶病毒所引起的甘蔗黄叶病是甘蔗生产中潜在的重要病毒病害之一。该病毒属黄症病毒科(Luteoviridae)中的马铃薯卷叶病毒属(Poleroviruses)。根据甘蔗黄叶病毒海南分离物(SCYLV-CHN-HN1)全基因组序列(GenBank No. HQ342888)，设计P0蛋白基因的一对特异性引物P0-BaitF/P0-BaitR。以实验室保存的重组质粒pMD18T-P0为DNA模板，PCR扩增P0蛋白基因。然后将P0蛋白基因和细菌双杂交诱饵质粒pBT分别进行双酶切后，连接构建重组诱饵质粒pBT-P0。经PCR扩增、双酶切鉴定和序列分析，表明获得了细菌双杂交重组诱饵载体pBT-P0，且编码框正确。将重组载体pBT-P0转化细菌双杂交系统BacterioMatchRⅡ Screening Reporter感受态细胞，进行自激活和毒性验证。结果显示pBT-P0重组载体在细菌双杂交系统中无自激活作用及毒性作用，表明本试验构建的pBT-P0可应用于该系统筛选与之互作的寄主蛋白。

甘蔗黄叶病毒；P0蛋白基因；细菌双杂交；诱饵质粒；构建