华文君 , 毕延震 , 刘西梅 , 张立苹 , 肖红卫 , 郑新民 , 华再东 , 任红艳

湖北省农业科学院畜牧兽医研究所, 武汉, 430064
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 146 篇   
收稿日期: 2015年03月02日    接受日期: 2015年03月31日

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采用CRISPR/Cas9技术制备质粒HRX-2MCS和PX330，两种质粒转染湖北白猪胎儿成纤维细胞，G418 筛选抗性细胞株。收集培养细胞提取总DNA，分子定位PCR法检测绿色荧光蛋白（GFP）基因在猪肌肉生长抑制素（MSTN）基因外显子上的定位整合情况，得到T1靶位点整合细胞5株和T3靶位点整合细胞3株。 Q-PCR定量分析结果表明3108号阳性细胞株MSTN 基因mRNA 表达量减少50%，实验获得的基因敲除细胞可以用于体细胞核移植法制备MSTN 基因敲除猪的研究。

CRISPR/Cas9；肌肉生长抑制素；基因敲除；表达