高炳淼 , 潘坤 , 田建平 , 魏娜 , 张俊清

海南医学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室, 海口, 571199
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 165 篇   
收稿日期: 2015年03月02日    接受日期: 2015年03月31日

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为了建立适合南药益智的ITS-PCR体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。利用植物基因组试剂盒法提取益智基因组DNA为模板，采用单因素和正交试验对ITS-PCR过程中的关键影响因素进行优化，并对ITS-PCR产物进行测序鉴定。实验结果表明最佳ITS-PCR反应体系（25 μL）为：Taq酶1.0 U，dNTPs 4 mmol/L，Mg2+ 0.5 mmol/L，引物2.0 μmol/L，模板20 ng，10×PCR Buffer (不含Mg2+) 2.5 μL；最佳扩增程序为：94℃预变性2 min；94℃变性30 s，55℃退火30 s，72℃延伸1 min，共32个循环；最后72℃延伸5 min。采用该最佳体系对益智基因组DNA进行PCR扩增，获得扩增产物经单向测序获得了益智ITS部分序列。建立了稳定的ITS-PCR体系，为研究益智遗传多样性分析奠定了基础。

益智；ITS-PCR；体系优化；正交设计