郭晓萍 , 陈时锦 , 张笠 , 蒋钦杨 , 兰干球 , 郭亚芬

广西大学动物科学技术学院, 南宁, 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 181 篇   
收稿日期: 2015年04月01日    接受日期: 2015年04月30日

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α-1,3半乳糖转移酶基因（α-1,3GT）在异种器官移植中的免疫排斥反应有重要的作用，本研究旨在构建α-1,3半乳糖转移酶基因的干扰载体，在mRNA和蛋白质水平鉴定并筛选出干扰效果最佳的序列。根据巴马小型猪GGTA1基因CDS序列，设计合成3对特异性单链siRNA序列以及一对阴性序列，构建GGTA1 RNA干扰载体分别命名为pLLU2G-shGGTA1-1、pLLU2G-shGGTA1-2、pLLU2G-shGGTA1-3和pLLU2G-shGGTA1-NC。将构建好的载体分别转染转染PK15细胞，通过qRT-PCR和Western blot检测GGTA1 mRNA及其蛋白的相对表达量。结果显示本研究成功构建了3个重组RNAi表达载体，与转染pLLU2G-NC和空白组相比，pLLU2G-shGGTA1-1、pLLU2G-shGGTA1-2 和 pLLU2G-shGGTA1-3 转染组的GGTA1 mRNA和蛋白表达量均明显下降，对mRNA表达的抑制效率分别为85.02%、86.05%和83.85%。本研究成功获得有效抑制广西巴马小型猪GGTA1基因表达的RNAi载体，为下一步生产沉默GGTA1基因广西巴马小型猪奠定基础。

巴马小型猪；α-1,3半乳糖转移酶基因；RNAi