周小芬^1,4 , 林卫萍¹ , 何华红³ , 李想¹ , 张焜^1,2 , 杜志云¹ , 王华倩¹

1广东工业大学轻工化工学院, 广州, 510006; 2五邑大学, 江门, 529020; 3广州市药品检验所, 广州, 510160; 4阳东广雅中学, 阳江, 529500
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基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 217 篇   
收稿日期: 2015年06月01日    接受日期: 2015年06月30日

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霍乱毒素由5个B亚基(CTB)和l个A亚基(CTA)(包括CTA1和CTA2)组成。该蛋白结构可帮助有毒的CTA1分子进入细胞。本研究拟利用原核不相容双质粒共表达系统获得霍乱毒素类似嵌合蛋白，用于大分子蛋白质黏膜给药的载体研究。将CTB基因片段克隆至载体pET-28a中，获得重组质粒pET-28a-CTB；以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)代替有毒的CTA1，在CTA2 序列N端融合穿膜肽(TAT)，将EGFP-CTA2-TAT基因克隆至载体pET-22b(+)中，获得重组质粒pET-22b-EGFP-CTA2-TAT。利用pET-28a-CTB和pET-22b-EGFP-CTA2-TAT二者不同抗性，将双质粒分步转化到大肠杆菌BL21中。表达条件为0.75 mM IPTG、20℃、200rpm诱导20h，重组嵌合蛋白能以可溶形式表达。经过Ni-NTA、Sephadex G-75纯化，Western blotting对蛋白质特异性进行鉴定，确定获得(CTB)₅/EGFP-CTA2-TAT嵌合蛋白。

霍乱毒素；增强型绿色荧光蛋白；嵌合蛋白；不相容质粒