何玉霞 , 周云飞 , 王娟 , 代晓璐 , 张军

重庆医科大学基础医学院, 重庆, 400016
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 247 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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本实验通过建立稳定的重亚硫酸盐测序（Bisulfite-sequencing PCR,BSP）检测平台，研究人类永生化肝细胞LO₂与人肝组织细胞中凝血因子Ⅷ（Coagulation factor Ⅷ, FⅧ）基因5′端CpG岛的甲基化状态及该CpG岛的甲基化在FⅧ表达调节中的作用。运用RT-PCR、Western-blot检测FⅧ在LO₂细胞与人肝组织中的转录及表达，Methprimer软件预测FⅧ基因5′端CpG岛并设计BSP引物，BSP联合TA克隆及质粒PCR各验证十个阳性单克隆送测序，QUMA软件对测序结果进行甲基化位点分析，以（甲基化CG位点个数）/（甲基化CG位点个数+非甲基化位点个数）计算甲基化率。结果显示，新鲜分离的人肝组织细胞能够稳定表达FⅧ，LO₂细胞不能表达；FⅧ基因5′端存在一个278bp的CpG岛，LO₂细胞中该CpG岛的甲基化率为93.48%，正常人肝组织中该CpG岛的甲基化率为93.91%。本实验成功建立稳定的BSP检测平台，并发现在LO₂细胞与人肝组织中，FⅧ基因5′端均存在一个被高度甲基化的CpG岛，人肝组织中FⅧ基因5′端CpG岛的甲基化可能参与维持体内FⅧ的低水平表达。

FⅧ基因；甲基化率；BSP；CpG岛