郭晓萍* , 张笠* , 黄玥萌 , 司景磊 , 鄢胜飞 , 陈时锦 , 蒋钦杨 , 郭亚芬 , 兰干球

广西大学动物科学技术学院, 南宁, 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 261 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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miR-486在肌肉生长发育和肌肉疾病的发生中具有重要的功能，本研究旨在构建猪miR-486慢病毒表达载体，鉴定其在巴马小型猪成纤维细胞中过表达水平，并利用胞质注射生产转基因胚胎，为研究miR-486在肌肉生长发育中的功能奠定基础。以巴马小型猪基因组DNA为模板，扩增miR-486前体及部分侧翼序列，利用T4连接酶将其连入pCDH-CMV-MCS-EF1载体，构建LV-miR-486慢病毒表达载体；在巴马小型猪成纤维细胞中过表达miR-486并利用real-time PCR验证其过表达效率，通过胞质注射生产转miR-486的猪胚胎。双酶切和测序结果证明成功构建了LV-miR-486重组载体，将慢病毒载体转染巴马小型猪成纤维细胞后miR-486上调，经胞质注射后在胚胎发育早期和囊胚期均有绿色荧光表达。本研究成功构建了猪miR-486慢病毒表达载体，在巴马小型猪成纤维细胞中过表达并生产出转miR-486的阳性胚胎，为后续研究miR-486的功能奠定基础。

miR-486；慢病毒表达载体；胞质注射