陈富美 , 付强 , 王焕景 , 赵秀灵 , 黄德伦 , 黄愉淋 , 潘宏 , 黄凤玲 , 张明

亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 动物繁殖研究所, 南宁, 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 301 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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本试验利用TMT标记并结合二维高效液相色谱/串联质谱联用的研究策略对水牛卵母细胞成熟前后差异蛋白质组进行分析。试验首先收集水牛成熟前卵母细胞和成熟后卵母细胞，分别提取卵母细胞这两个时期的蛋白质，酶解蛋白后进行TMT标记，其中TMT-126标记成熟后的肽段，TMT-129标记成熟前的肽段，标记后采用强阳离子交换柱对酶解得到的肽段进行分离，接着进行nano LC分离，质谱分析采用在线连接电喷雾串联Orbitrap 的方法，最后使用SEQUEST软件进行数据库搜索，采用生物信息学方法对鉴定得到的差异蛋白质进行初步分析。根据定量差异倍数≥2即认为蛋白表达存在差异，鉴定出卵母细胞成熟前高表达的蛋白有18种，成熟后高表达的蛋白有26种。对这些差异蛋白进行生物信息学分析表明，利用TMT标记并结合二维高效液相色谱/串联质谱联用的研究策略可以有效地分离和鉴定水牛卵母细胞成熟前后的蛋白质。本试验的结果为今后研究水牛卵母细胞成熟前后的蛋白质表达变化规律提供了理论试验依据，发现可能与水牛卵母细胞成熟相关的标志性蛋白： 调控细胞凋亡蛋白（BCL2L10）、胎球蛋白（AHSG）、伴侣蛋白（Erp29）。

水牛卵母细胞；蛋白质组；体外成熟；TMT；2D LC-MS/MS