孙建¹ , 颜廷献¹ , 涂玉琴¹ , 乐美旺¹ , 饶月亮¹ , 雷刚^2,3 , 颜小文¹ , 周红英¹

1江西省农业科学院作物研究所, 国家油料改良中心南昌分中心, 南昌, 330200; 2江西省农业科学院蔬菜花卉研究所, 南昌, 330200; 3江西农业大学农学院, 南昌, 330045
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2015 年, 第 34卷, 第 333 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

这是一篇采用Creative Commons Attribution License进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三方无条件的使用与传播。

限制性位点扩增多态性（RSAP）是一种新型分子标记技术。为获得适用于芝麻的RSAP-PCR的反应体系，本研究通过L₁₆（4⁵）正交设计与单因素试验相结合的方法，对PCR反应体系中模板DNA、Mg²⁺、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶等影响因素进行了试验优化。结果表明，芝麻RSAP-PCR的最佳反应体系为：在15 μL反应体系中，30 ng模板DNA、2.0 mmol/L的Mg²⁺、0.3 mmol/L的 dNTPs、0.6 μmol/L的引物和1.0 U的Taq DNA聚合酶。利用17个芝麻品种对该体系进行了稳定性验证和多态性检测，结果表明，该反应体系稳定、可靠，29对随机引物组合共扩增DNA条带454条，每对引物扩增8-21条，平均15.66条，多态性比例为0-56.25%，平均25.77%。利用普通芝麻与有限生长习性芝麻构建的F₂分离群体对RSAP标记进行了初步遗传验证，结果表明，F₂群体植株中出现了亲本位点的分离。该RSAP-PCR反应体系的建立与优化为芝麻遗传多样性分析、连锁图谱构建和分子标记辅助育种提供了新技术。

芝麻；RSAP；正交优化；体系验证