于兴达¹ , 王佩佩¹ , 汪亚媛¹ , 贾秀琪¹ , 张国松¹ , 尹绍武¹ , 陈树桥² , 周国勤²

1南京师范大学, 生命科学学院, 江苏省生物多样性与生物技术重点实验室, 南京, 210023; 2南京市水产科学研究所, 南京, 210036
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 45 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

这是一篇采用Creative Commons Attribution License进行授权的开放取阅论文。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许和同意第三方无条件的使用与传播。

先天免疫是机体防御病原微生物入侵的第一道防线，TLR能识别病原相关分子模式，通过依赖MyD88或TRIF信号传导通路启动先天免疫和适应性免疫而抵御病原入侵。本研究以河川沙塘鳢(Odontobutis potamophila)为研究对象，采用RACE、实时荧光定量PCR等技术，首次对该鱼的TLR2基因进行了克隆和表达模式分析。主要研究结果如下：TLR2基因的cDNA全长序列3473bp(Genbank登录号KP973949)，包括2631bp开放阅读框(ORF)、75bp的5´UTR区和767bp的3´UTR区，并且具有脊椎动物典型的加尾信号AATAAA和26bp的polyA尾巴，推测该序列编码876个氨基酸。TLR2基因存在LRR基序和TIR结构域，符合TLR家族所具备的重要特征；TLR2蛋白分子也存在多个功能位点。系统树中河川沙塘鳢与所有鱼类聚类为独立的分支，与鲈形目亲缘关系最近。应用RT-PCR法检测健康河川沙塘鳢鱼体中TLR2基因的mRNA组织分布情况。结果显示，TLR2基因在检测的12种组织中均有表达，在肝、肾、肠、血液和胃中都有较高的表达水平。人工感染嗜水气单胞菌后，对河川沙塘鳢3种主要免疫组织(脾、肾、肝)中进行不同时段表达量变化的检测，结果表明，TLR2基因在脾中感染后4h表达水平发生下降，随后的24-48h又上升，48h时达到顶峰，72-96h维持在略低于24h水平上。在肾中，感染后表达水平持续上升，且24-96h间保持相对稳定的表达水平。在肝组织中，感染后一直呈现上升趋势，72h时达到顶峰，其他时段表达水平相差不大。可见TLR2在河川沙塘鳢抵御外源微生物侵染的先天免疫中发挥重要作用。

河川沙塘鳢；TLR2；RT-PCR；表达分析