崔晶晶¹ , 吴凯峰² , 孙潇雨¹ , 王继超¹ , 张心愿¹ , 邱喻兰¹ , 莫云钧¹ , 胥文春¹

1重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆, 400016; 2遵义医学院第三附属医院检验科, 遵义, 563002
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基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 37 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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为构建肺炎链球菌减毒活疫苗SPY1矿化菌，并进一步探究其自身稳定性、热稳定性等生物学特性的改变，本研究以肺炎链球菌D39基因组DNA为模板设计合成构建突变体lytA基因所需引物，采用插入失活的方法构建SPY1-△lytA突变株，并以缺陷菌的生长特性以及PCR的方法进行鉴定；将SPY1-△lytA突变株于富钙环境中培养，用不同浓度的磷酸盐进行滴定，使其形成磷酸钙矿化壳，通过扫描电镜以及直接荧光反应来检测疫苗菌株矿化情况；并将矿化菌株与未矿化菌株同时置于37℃不同时间后通过比较其存活率来评价矿化菌的热稳定性。PCR结果以及细菌长时间不溶解的生长特性表明成功构建了SPY1-△lytA突变株；扫描电镜以及直接荧光反应结果显示细菌表面形成CaPi矿化外壳，并且SPY1-△lytA-CaPi矿化菌具有较好的热稳定性。本研究为肺炎链球菌活菌疫苗的进一步研发奠定了基础。

肺炎链球菌；减毒活疫苗；插入失活；生物矿化；热稳定性