柳参奎^1* , 刘卓明^2,3* , 李有志³ , 方宣钧^1,2,3

1. 东北林业大学盐碱地生物资源环境研究中心, 哈尔滨, 150040
2. 海德热带农业资源研究所, 三亚, 572025
3. 广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005
* 同等贡献作者
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2011 年, 第 30卷, 第 21 篇   doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0021
收稿日期: 2010年12月28日    接受日期: 2011年04月21日    发表日期: 2011年05月05日

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推荐引用：

引用格式(中文)：
柳参奎等, 2011,Bt Cry1Ac22 杀虫蛋白在酿酒酵母中表达和亚细胞定位,基因组学与应用生物学(online), Vol.30 No.21 pp.1133-1138 (doi: 10.5376/gab.cn.2011.30.0021)
引用格式(英文)：
Liu et al., 2010, Expression and Localization of Cry1Ac22 Crystal Protein from Bacillus thuringiensis W015-1 in Yeast (Saccharomyces cerevisiae), Bt Research (online), Vol.1 No.2 (DOI: 10.5376/bt.2010.01.0002)

为了弄清Bt Cry1Ac22杀虫晶体蛋白在真核中的表达与亚细胞定位，我们以载体pYES2为基础，将cry1Ac22杀虫基因和绿色荧光蛋白GFP基因融合，构建含Cry1Ac22毒蛋白和绿色荧光蛋白(GFP)的真核表达载体pYES2-Cry1Ac22-GFP。该融合基因以酵母GAL1启动子启动，经20%半乳糖大量诱导Cry1Ac22-GFP融合蛋白表达，在酵母细胞中呈点状聚集， SDS-PAGE检测表明在转化入pYES2-Cry1Ac22-GFP的菌液的粗蛋白中，表达一条新的蛋白条带，分子量约130 kD左右。在荧光显微镜下观察，显示Cry1Ac22-EGFP融合蛋白在酵母细胞膜上能够发出强烈荧光，表明cry1Ac22基因定位在酵母细胞膜上，与其蛋白跨膜结构预测相一致。本研究为Bt杀虫蛋白的功能研究及追踪转基因目标蛋白的踪迹提供思路和方法。

Bt；酿酒酵母；Cry1Ac22；绿色荧光蛋白；真核表达；亚细胞定位