吕玉伟 , 张雨靖 , 吕亚维 , 王睿劼 , 杨泽熵 , 王英娟

西北大学生命科学学院/陕西省生物重点实验室/西部资源与现代生物技术省部共建教育部重点实验室, 西安, 710069
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 33 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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贻贝(Mytilus galloprovincialis)足腺分泌的粘蛋白Mgfp-5，是一种粘合强度高、生物相容性好的生物粘合剂，可以广泛应用于医学、化学表面以及海洋工程等领域。天然获取Mgfp-5时易固化且含量低，难获得、成本高制约了其应用，所以更多学者尝试基因工程方法获得粘蛋白Mgfp-5，其中鲜见借助植物基因工程表达Mgfp-5的报道。本研究构建携带Mgfp-5基因的植物表达载体pRI101-Mgfp，以秦烟95烟草叶片为受体，通过根癌农杆菌LBA4404介导方法，遗传转化外植体，历经转染、抗性筛选及分子生物学鉴定，获得转基因烟草植株。研究表明正确构建的植物表达载体pRI101-Mgfp，可以在外植体预培养3d，农杆菌液OD₆₀₀=0.6，侵染10 min，共培养3 d，20 mg/L卡那霉素抗性筛选培养的条件下，携带外源Mgfp-5基因，顺利转化进入烟草小苗，经过PCR、RT-PCR检测目标基因Mgfp-5在转化小苗基因组中可以整合及表达，得到转Mgfp-5基因烟草植株，生根后移栽成活。本研究为粘合蛋白Mgfp-5的表达、提取纯化及功能等深入研究提供参考，也是优质粘合剂粘合蛋白材料获得的一条新途径。

粘蛋白Mgfp-5；根癌农杆菌；遗传转化；烟草