王宁宁 , 王会岩 , 许会静 , 张茹叶 , 陈秋池 , 李光宇

吉林医药学院检验学院, 吉林, 132013
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 40 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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TAZ基因在心磷脂代谢异常导致线粒体功能障碍中起重要作用。本研究旨在构建人TAZ-5 (hTAZ-5, Δ5)的基因工程菌，用乳糖诱导TAZ-5蛋白的表达，为后续hTAZ-5纯化、抗血清的制备及生理功能检测奠定基础。以hTAZ全长为材料，通过PCR方法扩增人hTAZ-5基因，将其插入到原核表达载体pEASY中。经菌落PCR筛选阳性克隆，并通过DNA测序确定原核表达载体pEASY-TAZ-5构建成功。将pEASY-TAZ-5转入大肠杆菌(E.coli)感受态细胞Transetta(DE3)中，用乳糖诱导蛋白表达，分别对诱导剂浓度、时间、时机及温度等条件进行优化，确定最优的乳糖诱导条件，并对表达产物进行可溶性分析。结果表明PCR扩增出约786 bp的目的产物，与预期的片段长度一致；hTAZ–5蛋白最优表达条件为终浓度2.0 g/L乳糖、A600=0.8、37℃下诱导4 h，可以达到良好的诱导效果；收集菌体中的上清和沉淀，进行可溶性分析，目的蛋白以包涵体的形式存在。Western blot分析表明重组蛋白TAZ表达成功。成功构建pEASY-TAZ-5原核表达载体，乳糖可诱导hTAZ-5(Δ5)基因表达，且效果很好。

hTAZ-5；TAZ；原核表达载体；重组蛋白表达