粟玉凤¹ , 李达根² , 邢燕¹ , 姚华¹ , 吴静雯¹ , 张雪梅¹

1重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室, 重庆, 400016, 2重庆市长寿区人民医院检验科, 重庆, 401220
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基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 124 篇   
收稿日期: 2015年12月29日    接受日期: 2016年02月02日

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本实验目的是研究肺炎链球菌rDnaJ-△A146Ply融合蛋白引起小鼠巨噬细胞的免疫应答机制。原核表达rDnaJ-△A146Ply重组蛋白，Ni⁺柱纯化后去除其内毒素。rDnaJ-△A146Ply刺激小鼠来源腹腔巨噬细胞6 h后，提取细胞RNA，RT-PCR检测白细胞介素6 (Interleukin- 6, IL-6)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α) mRNA表达水平。24 h后取细胞培养上清，ELISA检测IL-6和TNF-α蛋白表达水平。信号通路抑制剂预处理腹腔巨噬细胞1 h后加蛋白刺激，ELISA检测上清中IL-6、TNF-α蛋白表达水平抑制情况。取不同时间点处理的细胞进行免疫印迹(Western Blot)，检测p-Akt和p-NF-κB表达水平。制备获得纯度90%以上、内毒素含量小于0.1 EU/ug的rDnaJ-△A146Ply融合蛋白；rDnaJ-△A146Ply可刺激腹腔巨噬细胞IL-6、TNF-α mRNA及蛋白水平表达明显上调、增强Akt和NF-κB磷酸化；Akt和NF-κB抑制剂可显著减少IL-6和TNF-α表达。因此，rDnaJ-△A146Ply融合蛋白通过Akt和NF-κB信号通路刺激巨噬细胞诱导免疫应答。

肺炎链球菌DnaJ-△A146Ply；巨噬细胞；Akt；NF-κB