吕丁丁^1,2 , 耿涛¹ , 侯成香¹ , 黄玉霞¹ , 覃光星¹ , 郭锡杰¹

1 江苏科技大学生物技术学院, 镇江, 212018;
2 镇江市高等专科学校, 镇江, 212003
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 191 篇   
收稿日期: 2016年01月25日    接受日期: 2016年02月24日

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家蚕抗菌肽cecropin A (BmCecA)是家蚕体液免疫中产生的一种重要的抗菌肽。本研究利用RT-PCR技术克隆出BmCecA基因的开放阅读框(ORF)，该ORF编码22个氨基酸的信号肽和37个氨基酸的成熟肽，通过蛋白结构分析该成熟肽形成经典的双亲α螺旋。实时荧光定量PCR表明，BmCecA在5龄家蚕的体壁、马氏管、中肠、丝腺、血淋巴和脂肪体中均有表达，在脂肪体中表达量最高，其次是血淋巴。通过固相合成法合成BmCecA成熟肽，用质谱和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析表明其分子量约为4.05 kDa，高效液相色谱检测其纯度为89.14%。用合成多肽分别对革兰氏阴性菌大肠杆菌(Escherichia coli)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)，及革兰氏阳性菌球形节杆菌(Arthrobacter globiformis)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)做体外抑菌实验，发现BmCecA对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均有明显的抑菌作用。首次用BmCecA做家蚕的体内抑菌实验，结果显示注射BmCecA的家蚕存活率显著高于对照组，相对于对照组，致死中时间(LT50)分别延长了17.85% (大肠杆菌)、37.31% (铜绿假单胞菌)、21.92% (球形节杆菌)、49.45% (枯草芽孢杆菌)，差异显著。凝胶迁移实验结果说明BmCecA可能在破坏细菌细胞膜之后作用于基因组DNA和RNA，从而导致细菌的快速死亡。本研究结果有利于从分子水平上深入理解家蚕乃至其它昆虫抵御细菌侵染的防御机理，也为家蚕的抗菌育种提供理论依据。

家蚕；cecropin A；抗菌活性；细菌