李竹青 , 杨立桃 , 王灿华

上海交通大学生命科学技术学院, 上海, 200240
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 333 篇   
收稿日期: 2016年04月11日    接受日期: 2016年05月11日

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标准物质对于实时荧光定量PCR进行转基因作物及其产品的定量分析尤为重要，但我国转基因生物的标准物质研制还处于初级阶段，因此研制新型的标准物质对解决转基因标准物质匮乏有着重要的意义。本文针对转基因水稻RJ5构建了质粒标准分子pRJ5，并对其进行定量适应性鉴定、均匀性测试、稳定性考察，并利用数字PCR方法测定其量值。结果表明，以质粒分子pRJ5为标准物质构建的标准曲线具有良好的反应效率和线性相关性及良好的重复性和重演性。在定量PCR体系检测极限（LOD）低至5拷贝/μL，定量极限（LOQ）约为10拷贝/μL。均匀性测试的数据表明，质粒标准分子在管间和管内无明显差异，具有良好的均匀性。稳定性测试的结果表明，该质粒标准分子至少可以稳定地保存半年以上。数字PCR（3D-d PCR）的量值测定准确度良好。实际样品的定量分析偏差范围在1.31 %至2.44%，相对标准偏差值在0.98%至10.05%。以上结果说明了质粒标准分子pRJ5适合作为标准物质对转基因水稻RJ5进行定量检测。

转基因水稻； 质粒标准分子；荧光定量PCR；数字PCR；量值测定