原晓龙¹ , 赵能² , 陈剑¹ , 王娟¹ , 杨宇明¹ , 王毅¹

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基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 390 篇   
收稿日期: 2016年05月10日    接受日期: 2016年06月10日

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以硬枝树花(Ramalina conduplicans)地衣型真菌为研究材料，采用简并引物扩增获得腺苷酰化结构域(A结构域)，并以其为模板，通过Gene walking的方法获得非核糖体多肽合成酶(NRPSs)基因的全长，并对RcNRPS基因进行生物信息学分析、分子系统进化分析及RT-PCR分析。RcNRPS基因的开放阅读框总长3150bp，编码1049个氨基酸残基。结构域分析显示：硬枝树花的NRPS基因含有腺苷酰化结构域(A结构域)、巯基化结构域(T结构域)、缩合结构域(C结构域)。将硬枝树花的RcNRPS蛋白序列与曲霉属34条NRPS蛋白构建系统进化树中，结果显示其为铁载体。生物信息学分析表明：NRPSs为非分泌蛋白，定位于细胞质基质中。RT-PCR分析表明：酵母粉是RcNRPS基因诱导表达所必需的，蔗糖可有效的促进该基因的诱导表达。

硬枝树花；非核糖体多肽合成酶；克隆；序列分析；诱导表达