何佳鲜 , 江雷雨 , 洪敏 , 冯琛 , 刘勋菊 , 陈清 , 张勇 , 罗娅 , 王小蓉 , 汤浩茹

四川农业大学园艺学院, 成都, 611130
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2017 年, 第 36卷, 第 4 篇   
收稿日期: 2016年08月16日    接受日期: 2016年09月20日

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利用中心组合设计(CCD)探究pET-32a(+)-FaMYB5融合蛋白原核表达的最优条件。以不同的诱导温度、诱导时间、菌液初始浓度和异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)终浓度为四个考察因素，以可溶性蛋白含量为考察指标，在大肠杆菌中表达pET-32a(+)-FaMYB5融合蛋白，采用玻璃珠法破菌，提取蛋白质后通过SDS-PAGE凝胶电泳鉴定表达产物。经响应面优化后，在37℃培养工程菌至菌液OD₆₀₀=0.74后，加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至终浓度为0.40 mmol/L，在25.51℃条件下诱导培养8 h，可获得最高产量的可溶性目的蛋白，为128 µg/mL。最优表达条件的获得，为后期纯化该可溶性蛋白和鉴定FaMYB5蛋白与顺势作用元件的作用情况提供了一定的理论依据。

草莓；FaMYB5；原核表达；响应面优化