广西大学动物科学技术学院, 南宁, 530004
作者 通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 252 篇
收稿日期: 2016年03月08日 接受日期: 2016年04月20日
作者 通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 252 篇
收稿日期: 2016年03月08日 接受日期: 2016年04月20日
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摘 要
葡萄糖转运蛋白4(Glut4)是调控肌肉葡萄糖代谢的关键因子。本研究旨在克隆广西巴马小型猪Glut4基因,构建真核表达载体,转染C2C12细胞研究Glut4功能。以广西巴马小型猪背最长肌组织作为实验材料,通过RT-PCR 技术扩增出Glut4基因编码序列,连接入PMD18-T克隆载体,测序鉴定正确后提取克隆质粒。用BamHⅠ和HindⅢ限制性内切酶双酶切克隆质粒,获得Glut4片段,连接至pEGFP-N1 载体上,构建pEGFP-N1-Glut4表达载体,提取pEGFP-N1-Glut4重组质粒转染至C2C12细胞,观察细胞荧光表达情况,并检测转染24h和48h时培养液的葡萄糖水平。实验结果表明:广西巴马小型猪Glut4基因编码区序列长1530 bp,编码509个氨基酸,与参考序列(序列号为EU590115.1)的同源性为99.7%;重组质粒转染C2C12细胞能表现出绿色荧光。转染24h和48h时,pEGFP-N1-Glut4组细胞培养液的葡萄糖浓度均显著低于空载体组(16.08±0.49 vs. 17.13±0.13,4.93±0.19 vs. 6.28±0.12,P<0.01)。在C2C12成肌细胞中过表达广西巴马小型猪Glut4基因,能增加细胞的葡萄糖摄入量。
关键词
广西巴马小型猪;Glut4基因;基因克隆;真核表达
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