赵秀玲 , 潘宏 , 濮黎萍 , 张鹏飞 , 王焕景 , 张明

广西大学动物繁殖研究所,亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室, 南宁, 530004
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 476 篇   
收稿日期: 2016年06月27日    接受日期: 2016年07月27日

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本试验旨在构建4条针对Iqcf5(IQ motif containing F5)基因的shRNA干扰载体，并进行有效干扰靶点的筛选，为以后进一步对Iqcf5基因功能的研究奠定基础。提取成年小鼠睾丸组织的RNA，进行反转录，扩增Iqcf5基因的编码区，并将其克隆到真核表达载体HP362-PBL-PBR-CAG-mCherry-WPRE上。设计针对Iqcf5基因的shRNA序列，应用基因重组技术插入到pGPU6/GFP/Neo 载体中，将其与真核表达载体共转染293T细胞，进行有效干扰靶点的筛选。构建了Iqcf5基因的真核表达载体和四条针对目的基因Iqcf5的shRNA，分别是 Iqcf5-107，Iqcf5-257，Iqcf5-425和Iqcf5-500和一个阴性对照质粒，经测序鉴定正确，共转染293T细胞，经过筛选Iqcf5-257和Iqcf5-500在293T细胞中对Iqcf5基因表达的干扰效果最佳。成功构建了Iqcf5基因的表达载体及其shRNA载体，并进行了有效干扰靶点的筛选，为下一步对Iqcf5基因功能的研究奠定了基础。

shRNA；钙调蛋白；RNAi；Iqcf5基因