陈韵如 , 王湘秀 , 李绍娟 , 刘桂芬

同济大学生命科学与技术学院, 上海, 200092
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2016 年, 第 35卷, 第 217 篇   
收稿日期: 1970年01月01日    接受日期: 1970年01月01日

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本研究以斑马鱼为研究对象，成功构建组蛋白甲基化酶WHSC1L1基因敲除的纯合突变体，为研究WHSC1L1在胚胎发育早期组蛋白甲基化修饰的影响提供模型。本研究采用CRISPR/Cas9技术进行基因编辑，通过http://crispr.dfci.harvard.edu/SSC/和http://crispr.mit.edu/网站分别对靶位点序列特征和脱靶可能性打分，设计高活性的single-guide RNA (sgRNA)，通过TA克隆测序检测到F₀突变效率高达75%，通过F₀代雌雄交配，对得到13条F₁代成体进行逐一剪尾鳍鉴定基因型，得到6条WHSC1L1基因缺陷的纯合突变体，6条纯合体均为同一种突变类型，且突变类型为移码突变。通过设计高效率的sgRNA可以直接通过F₀代雌雄交配获得纯合突变体，省去了F₀代与WT杂交确定突变率的步骤。本研究得到WHSC1L1基因缺陷的纯合体，为研究胚胎发育过程中由此基因突变引起的组蛋白甲基化修饰变化对胚胎发育的影响及机制提供了有力的帮助。

斑马鱼；WHSC1L1基因；CRISPR/Cas9；纯合突变体