骆春艳¹ , 王嘉军² , 张伟³

1三峡大学第一临床医院医保科, 宜昌, 443000; 2湖北民族学院医学院, 恩施, 445000; 三峡大学医学院, 宜昌, 443002
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2017 年, 第 36卷, 第 41 篇   
收稿日期: 2016年08月10日    接受日期: 2016年09月13日

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探讨Toll样受体4结合脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)对天然调节性T细胞(natural regulatory T cells, nTregs)抑制功能的影响及其机制。采用磁珠分选健康人外周血中nTregs，并用流式细胞术检测分选纯度后进行原代细胞培养。将不同浓度的LPS (10, 1, 0.1 μg/mL)分别加入抗TLR4单抗封闭的nTregs (即anti-TLR4+LPS组)和正常nTregs (即Non anti-TLR4组)两组细胞、同时设定不加LPS作为对照组。采用实时定量PCR和酶联免疫吸附(ELISA)检测各组nTregs中IL-10、TGF-β的mRNA表达水平和细胞培养上清液中蛋白含量。采用CFSE法流式细胞术检测不同浓度LPS处理的nTregs与CD4+T效应细胞混合培养后CD4+T细胞的增殖水平。Western-blot检测LPS刺激后nTregs的胞浆及胞核中NF-κBP65蛋白表达水平。结果分选得到的nTregs纯度＞82%(84.52±2.10%)。Non anti-TLR4组nTreg细胞中IL-10的mRNA表达水平和培养上清液中蛋白含量均较对照组和anti-TLR4组显著增加(p＜0.05)，且anti-TLR4组nTreg细胞IL-10的mRNA和培养上清液蛋白含量均较对照组显著降低(p＜0.05)；Non anti-TLR4组nTreg细胞中TGF-β的的mRNA表达水平和培养上清液中蛋白含量均较对照组和anti-TLR4组均显著降低(p＜0.05)，且anti-TLR4组nTreg细胞中TGF-β的mRNA表达水平和培养上清液中蛋白含量较对照组显著增高(p＜0.05)。nTregs可显著抑制CD4+T细胞的增殖，且与CD3/CD28抗体活化的阳性对照组相比有差异(p＜0.05)。Non anti-TLR4组中，CD4+T细胞增殖指数较对照组显著降低(p＜0.05)；anti-TLR4组中，CD4+T细胞增殖指数较阴性对照组显著增加(p＜0.05)，较阳性对照组亦明显增加(p＜0.05)。1 μg/mL LPS刺激后，Non anti-TLR4组nTregs胞浆蛋白中NF-κBp65的含量较对照组降低，而胞核中则相应增加；anti-TLR4组则无明显变化。因此本研究认为，nTregs膜型TLR4与LPS相互结合，可促使nTregs抑炎性因子(IL-10, TGF-β) mRNA表达水平和分泌含量产生变化，可增强对效应性CD4+T细胞增殖的抑制功能，其变化机制可能与NF-κB信号分子活化相关。

Toll样受体4；脂多糖；调节性T细胞；NF-κB；细胞因子