马笃军¹ , 彭力平¹ , 王立新¹ , 余阗¹ , 裴军宇¹ , 李明华² , 徐宁达³ , 肖伟¹

1广州中医药大学深圳临床医学院, 深圳, 518033; 2深圳北京大学香港科技大学医学中心生物医学研究所, 深圳, 518000; 3广州中医药大学深圳医院, 深圳, 518034
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基因组学与应用生物学, 2017 年, 第 36卷, 第 35 篇   
收稿日期: 2016年08月10日    接受日期: 2016年09月14日

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探讨建立兔骨髓间质干细胞(BMSCs)的体外分离纯化、扩增和鉴定的方法，为BMSCs的进一步诱导分化和应用奠定基础。首先抽取兔髂骨骨髓，采用Percoll密度梯度离心法得到骨髓单个核细胞，接种后形成单层贴壁细胞，经胰蛋白酶消化后传代培养扩增，倒置相差显微镜观察细胞生长状态，细胞免疫组化检测CD73、CD34。结果表明，成功建立了兔BMSCs体外分离及培养扩增的方法，发现BMSCs表现贴壁生长，P0代时呈集落生长，细胞呈梭形，传代后细胞增殖速度加快，形态开始多样化；细胞免疫组化显示BMSCs表达CD73，未表达CD34，反复传代后CD73表达效率增高。上述研究表明，Percoll密度梯度离心联合骨髓贴壁法，能有效分离、纯化和扩增BMSCs，提取的细胞具有BMSCs的生长特性和抗原表型，其中P3~P6代细胞增殖能力强，可用于进一步的研究工作。

骨髓间充质干细胞；细胞培养；密度梯度离心法；兔