张民秀 , 谢芝勋^* , 黄莉^* , 谢志勤 , 刘加波 , 谢丽基 , 邓显文 , 罗思思 , 黄娇玲

广西壮族自治区兽医研究所, 广西兽医生物技术重点实验室, 南宁, 530001
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2018 年, 第 37卷, 第 42 篇   
收稿日期: 2016年09月18日    接受日期: 2016年12月20日    发表日期: 2018年04月16日

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构建H9N2亚型禽流感病毒M2蛋白胞外区（M2e）和HA蛋白颈部区（HA2）串联体，并在原核系统中进行重组蛋白的表达，以便研究重组蛋白的反应原性。以含有全长H9N2亚型AIV HA基因的质粒为模板，经过PCR扩增得到HA2基因；利用BglⅡ和BamHI之间互为同尾酶关系，构建三个拷贝M2e和HA2基因的串联体，并连接入原核表达载体pGEX-4T-1载体构成3M2e+HA2-pGEX重组质粒；同时构建单独表达HA2蛋白的原核表达重组质粒HA2-pGEX；DNA测序鉴定这两种重组质粒正确后，转化至表达宿主菌中；经不同IPTG浓度进行诱导，SDS-PAGE电泳鉴定重组蛋白大小，对蛋白进行可溶性分析并进行纯化；采用Western-blot法对两种重组蛋白的反应原性进行分析。结果显示， 3M2e+HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白分别经终浓度为0.5mmol/L和0.25mmol/L的IPTG诱导，37℃培养4h时，表达量最高；3M2e+HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白大小分别为59.4ku和 49.8 ku；对重组蛋白进行可溶性分析显示，两种重组蛋白均以包涵体形式存在；Western-blot分析显示，3M2e+HA2-pGEX和HA2-pGEX重组蛋白与免疫H9N2禽流感病毒后获得的阳性血清具有良好的特异性反应，为进一步研究HA2和3M2e+HA2蛋白的免疫原性和开发具有交叉保护能力的广谱H9N2亚型禽流感疫苗奠定基础。

H9N2 亚型禽流感病毒；HA 蛋白颈部区蛋白(HA2)；3M2e+HA2 串联蛋白