马伏宁 , 谭琳 , 郭刚 , 臧晓平 , 殷晓敏 , 王达新 , 马蔚红

中国热带农业科学院海口实验站, 海口, 570102
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2018 年, 第 37卷, 第 34 篇   
收稿日期: 2016年12月24日    接受日期: 2017年02月24日    发表日期: 2018年02月25日

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采用硫酸铵盐析、DEAE-Sepharose FF离子交换、Sephadex G-50凝胶层析等方法从方格星虫（Sipunculus nudus）内脏组织中分离纯化出一种水解纤维蛋白的活性酶，命名为SNF1。经SDS-PAGE及native-PAGE分析其分子量为约24～26kD的单链蛋白。MALDI-TOF MS分析分子质量为842.4146的肽段与NCBI报道的方格星虫纤溶酶（gb|AEA06599.1|）肽段匹配。根据该纤溶酶cds基因序列设计引物，通过RT-PCR法扩增基因，并连接pMD19-T载体转化大肠杆菌E.coll DH5a感受态细胞。克隆转化子测序得到273bp的纤溶酶基因序列，与该报道方格星虫纤溶酶基因序列相似度96%。本研究为此方格星虫纤溶酶cDNA全长序列的克隆及在原核或真核生物中表达的深入研究提供基础。

方格星虫；纤溶酶；RT-PCR；基因克隆