王芹¹ , 汪桂玲^1,2* , 陈亚¹ , 王雅昱 ¹ , 徐智诚 ¹

1 上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室, 上海, 201306;
2 上海市水产养殖工程技术研究中心, 上海, 201306
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2018 年, 第 37卷, 第 40 篇   
收稿日期: 2016年12月10日    接受日期: 2017年03月10日    发表日期: 2018年02月25日

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为探究三角帆蚌基质蛋白基因HcCA3的功能，本研究根据HcCA3基因的cDNA 全长序列，设计并合成特定的干扰链(siRNA)，将干扰链注射到三角帆蚌闭壳肌内，实时荧光定量 PCR (qRT-PCR)检测 HcCA3基因在外套膜不同部位即前端缘膜(amp)、后端缘膜(pmp)和中央膜(mc)的表达变化。在 RNA 干扰预实验中，筛选了三条目的基因干扰链，其中 siRNA-HcCA3-1 干扰链干扰效果最好；同时筛选了 4 条阴性对照链，发现HcCA3基因在注射不同的阴性对照链的各个组织中的表达均呈现不同程度的显著性下降，并没有筛选到合适的阴性对照链。在 RNA 干扰正式实验中，随着累计注射干扰链siRNA-HcCA3-1，HcCA3 基因在前端缘膜和后端缘膜内出现了相似的表达特征，12 d 出现了敲降作用(分别为对照组的 28%和 30%)，HcCA3 基因在中央膜中表达从12 d开始显著下降(为对照组的 84%)，18 d为对照组的 76%。本实验通过累积注射 siRNAHcCA3-1，成功的抑制了HcCA3基因在外套膜不同部位的表达，推测该基因参与了贝壳和珍珠的矿化，为进一步研究 HcCA 3 基因的功能提供了基础。

三角帆蚌；HcCA3； RNA 干扰；荧光定量