庞耀珊¹ , 谢芝勋¹ , 谢丽基¹ , 邓显文¹ , 谢志勤¹ , 刘加波¹ , 谢体三²

1 广西壮族自治区兽医研究所/广西畜禽疫苗新技术重点实验室, 南宁, 53000
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2012 年, 第 31卷, 第 18 篇   
收稿日期: 2012年02月27日    接受日期: 2012年03月09日

这是一篇《基因组学与应用生物学》Online Publishing in Advance 印刷版数字优先出版的论文。如果需要下载阅读全文，请订阅。

血凝素(hemagglutinin, HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的一个重要表面抗原性蛋白，在疾病诊断和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径，利用生物信息学软件，对H5N1亚型AIV HA 基因编码的氨基酸序列进行分析，在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗原性等重要特性后，构建了HA抗原表位重组表达质粒pET-32a(+)-HA。经测试，该重组质粒在1 mmol/L IPTG诱导剂作用下诱导过夜，能在大肠杆菌Rosetta-gami B (DE3)中高效表达，并得到48.1 kD大小的目的重组表达蛋白。重组蛋白用6×His-tagged protein纯化试剂盒纯化后，与福氏佐剂等量混合制备成抗原，以200 μg/鸡的剂量皮下注射2月龄SPF鸡3次，采血分离血清。Western-Blot试验结果表明，该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及H5N1亚型AIV阳性血清发生特异性反应，在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带。说明本试验研究的HA抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性，保留了HA蛋白的抗原活性，提示该重组蛋白在H5亚型AIV的防治技术研究中具有重要的实际应用价值。

禽流感病毒( AIV)； H5N1亚型； 抗原表位；表达