李雨倩 , 唐姚 , 李斓馨 , 汪秀容 , 陈梅依 , 黄燕

四川农业大学生命科学院, 雅安, 625000
作者    通讯作者
基因组学与应用生物学, 2018 年, 第 37卷, 第 57 篇   
收稿日期: 2017年03月10日    接受日期: 2017年04月03日    发表日期: 2018年04月12日

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CRISPR/Cas系统来源于古细菌和细菌在进化过程中逐渐形成的一种适应性免疫系统，研究人员发现该系统实际就是一种基因编辑器，可以用来删除、添加、激活或抑制其他生物体的目标基因，是一种可以被广泛应用的生物技术。其中，CRISP/Cas9是目前研究最深入的CRISPR/Cas系统类型。CRISPR/Cas9技术在基因编辑方面有着效率高、速度快、简单经济等特点，该系统能在sgRNA的引导下利用Cas9核酸酶对DNA进行定点切割。然而，此系统的缺点在于一对sgRNA具有较高的脱靶率。本实验拟通过改造CRISPR/Cas9相关载体，一方面简化载体构建步骤，另一方面通过使用两对sgRNA1和sgRNA2，进一步提高靶标识别特异性，克服一对sgRNA具有较高脱靶率的问题。实验以拟南芥基因组中U-Box E3家族基因中三个高度同源基因为靶对象，通过设计两对sgRNA引物，利用改造后的CRISPR/Cas9载体构建拟南芥多基因缺失突变体体系。该体系的构建，将极大的有利于后续拟南芥基因组中家族基因功能的研究，快速、高效地克服功能冗余问题。

CRISPR/Cas； 基因敲； 拟南芥；U-Box E3