缪炜 , 袁冬霞 , 冯立芳 , 熊杰

1中国科学院水生生物研究所, 水生生物多样性与保护重点实验室, 武汉, 430072
2浙江工商大学食品与生物工程学院, 杭州, 310012
作者    通讯作者
水生生物研究, 2013 年, 第 2卷, 第 9 篇   
收稿日期: 2013年09月15日    接受日期: 2013年10月02日    发表日期: 2013年10月22日

本文首次以英文发表在 《基因组学与应用生物学》(2013年第32卷第4期548-556页)上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用 Creative Commons Attribution License 协议对其进行授权，用中文再次发表与传播。只要对原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。如果读者对中文含义理解有歧义，请以英文原文为准。

推荐引用：

引用格式(中文):

缪炜, 四膜虫rDNA 表达载体的改造及用于异源基因的高效表达, 基因组学与应用生物学, 32(4): 548-556(10.3969/gab.032.000548)

引用格式(英文):

Miao et al.,2013, Modification of Tetrahymena rDNA Expression Vector Used for Efficient Expression of ExogenousGene, Genomics and Applied Biology (Online) , 32 (4): 548-556(10.3969/gab.032.000548)

基于四膜虫小核rDNA 改造得到的pD5H8 载体，在转染进接合生殖时期的四膜虫后能发育成9 000~10 000 拷贝的大核rDNA，因此pD5H8 载体是四膜虫异源基因表达的研究热点；但其载体上匮乏合适的克隆位点和无启动子结构阻碍了该载体的进一步发展。本研究在四膜虫启动子HSP70-2 和终止子HSP70-1 之间，通过稀有酶切位点I-Sce Ⅰ导入细菌绿色荧光蛋白(HGFP)这一筛选标记，由此组成的DNA 片段(HSP70-2 5' UTRI-Sce Ⅰ-HGFP-I-Sce Ⅰ-HSP70-1 3' UTR)整合进pD5H8，将之改造成pD5H8-HGFP 表达载体。来自真核生物的绿色荧光蛋白(GFP)藉由I-Sce Ⅰ酶切位点一步导入pD5H8-HGFP 表达载体后，在四膜虫中大量表达且具有生物学活性。因此，改造后的pD5H8-HGFP 表达载体拥有一步法引入异源基因，几乎无酶切位点的限制，有效的筛选标记，高效的异源基因表达能力，以及环境友好、便捷可控等诸多优点，这对于深入开展四膜虫基因功能的过表达研究和开发异源基因在四膜虫这一真核表达系统中的应用奠定了技术基础。

四膜虫；rDNA；pD5H8；pD5H8-HGFP；异源基因表达