2海南省热带农业资源研究所,三亚,海南,中国
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基因组学与生物技术, 2013 年, 第 2 卷, 第 3 篇 doi: 10.5376/gb.cn.2013.02.0003
收稿日期: 2013年11月20日 接受日期: 2013年12月15日 发表日期: 2013年12月26日
Zhou, 2014, Protocol of SDS-PAGE for Proteomic Analysis of Bt Parasporal Crystals, Bioscience Methods, 2013, Vol. 4, No.1, 1-4 (doi: 10.5376/bm.2013. 04.0001)
利用SDS-PAGE电泳技术能有效观察Bt菌株在芽孢形成期产生伴胞蛋白的蛋白组情况(proteomic profile),是直接了解Bt菌伴胞蛋白特征、特性的有效方法。但是SDS-PAGE电泳技术操作较为复杂、实验结果易受试验条件、 多种试验因素的影响。本文报告了用SDS-PAGE电泳技术获得理想实验结果的分析Bt伴胞蛋白谱的实验方法和技巧。案例研究证实本报告的实验方法获得的结果可靠、稳定、具有较好的可重复性。
Bacillus thuringiensis,简称Bt,是革兰氏阳性、芽孢形成菌,其显著的特征是能在芽孢形成期产生使昆虫致死的伴胞晶体蛋白质。了解Bt菌在芽孢形成期产生的伴胞晶体蛋白组,就可以了解该Bt菌可能产生伴胞蛋白的种类和数量以及遗传多样性。因此,SDS-PAGE电泳技术成为Bt菌伴胞晶体蛋白研究的最常用的方法之一,也是分离制备伴胞晶体蛋白的技术手段。SDS-PAGE电泳技术是基于不同的蛋白质由于电泳迁移率不同而被分离的一种实验技术,常用于鉴定各种生物的蛋白质组分及分子量大小。实验结果易受试验条件、 多种试验因素的影响。本文报告了用SDS-PAGE电泳技术获得理想实验结果的分析Bt伴胞蛋白谱的实验方法和技巧。
1仪器设备及操作
本实验采用BIO-RAD Mini-PROTEAN® Tetra System进行SDS-PAGE电泳(图1),该装置由美国BIO-RAD公司生产,仪器使用步骤请参照BIO-RAD Mini-PROTEAN® Tetra System说明书。
图1 BIO-RAD Mini-PROTEAN® Tetra系统
Figure 1 BIO-RAD Mini-PROTEAN® Tetra System
2培养基、化学试剂及配置
本实验用的4xTris.HCl/SDS pH8.8