刘辰^1,2 , 张文飞^1,2 , 周燕¹ , 李有志²

1海南省热带农业资源研究所, 三亚, 572025, 中国;
2广西大学生命科学与技术学院, 南宁, 530005, 中国
作者    通讯作者
基因组学与生物技术, 2012 年, 第 1卷, 第 7 篇   doi: 10.5376/gb.cn.2012.01.0007
收稿日期: 2012年06月26日    接受日期: 2012年08月07日    发表日期: 2012年08月09日

本文首次以英文发表在 Bt Research (2011年第2卷第2期第9-13页)上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用 Creative Commons Attribution License 协议对其进行授权，用中文再次发表与传播。只要对原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。如果读者对中文含义理解有歧义，请以英文原文为准。

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苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis, 简称Bt) 的特征是能够在产生芽孢的同时伴随产生伴孢晶体蛋白(parasporal crystal proteins)。为了实现Bt cry基因的表达不依赖于芽孢形成，本研究试图设计能在苏云金芽孢杆菌的营养期表达的杀虫晶体蛋白表达载体。首先，我们以cry3Aa启动子基因为模板设计了一对特异引物，从苏云金芽孢杆菌拟步虫甲亚种(Bt subsp. tenebrions)中扩增出与设计目的片段大小一致的启动子DNA片段并测序验证；然后，我们将该DNA片段平末端连接到穿梭载体pBU4上，构建了一个不依赖芽孢形成并能在营养期表达的新载体pBUC3。为了验证构建的载体在营养期能否表达Bt cry基因，我们将cry1Ac31基因连接到载体上，随后通过电击转化，将含有cry1Ac31基因的表达载体转入Bt无晶体突变株IPS。最后，利用PCR、镜检和SDS-PAGE进行验证，结果表明cry1Ac31基因在菌体生长营养期即得到了表达。我们的研究表明，cry3Aa启动子活性不依赖于芽孢形成，可能是实现cry基因在苏云金芽孢杆菌的营养期表达的有用的表达原件。

苏云金芽孢杆菌；cry3Aa启动子；营养期表达载体；cry1Ac31表达