H5N1亚型AIV HA抗原表位的高效表达及其抗原活性分析 
庞耀珊1 
,
谢丽基1 ,
邓显文1 ,
谢志勤1 ,
刘加波1 ,
谢体三2 ,
谢芝勋1 
,
谢丽基1 ,
邓显文1 ,
谢志勤1 ,
刘加波1 ,
谢体三2 ,
谢芝勋1
1广西壮族自治区兽医研究所, 广西畜禽疫苗新技术重点实验室, 南宁, 530001;
2南宁市蓝光生物技术有限公司, 南宁, 530007
作者 通讯作者
医学检验检疫杂志, 2012 年, 第 1卷, 第 2 篇 doi: 10.5376/jmiq.cn.2012.01.0002
收稿日期: 2011年05月17日 接受日期: 2012年07月15日 发表日期: 2012年07月23日
2南宁市蓝光生物技术有限公司, 南宁, 530007
作者 通讯作者
医学检验检疫杂志, 2012 年, 第 1卷, 第 2 篇 doi: 10.5376/jmiq.cn.2012.01.0002
收稿日期: 2011年05月17日 接受日期: 2012年07月15日 发表日期: 2012年07月23日
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本文首次发表在 《基因组学与应用生物学》(2012年第31卷第2期109-116页)上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用 Creative Commons Attribution License,协议对其进行授权，再次发表与传播。只要对原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。
推荐引用：
引用格式(中文)：
庞耀珊等, 2012, H5N1亚型AIV HA抗原表位的高效表达及其抗原活性分析, 医学检验检疫杂志(online) Vol.1 No.2 pp.7-14 (doi: 10.5376/jmiq.cn.2012.01.0002)
引用格式(英文)：
Pang et al., 2012, High Level Expression and Antigenic Analysis of H5N1 AIV Hemagglutinin Epitopes, Yixue
Jianyan Jianyi Zazhi (online) Vol.1 No.2 pp.7-14 (doi: 10.5376/jmiq.cn.2012.01.0002)
摘 要
血凝素(hemagglutinin, HA)蛋白是禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)的一个重要表面抗原性蛋白，在疾病诊断和防治上有重要意义。本研究为了探讨一种更为简便有效的HA重组蛋白表达途径，利用生物信息学软件，对H5N1亚型AIV HA基因编码的氨基酸序列进行分析，在分析其在大肠杆菌中的密码子偏好性、稀有密码子分布情况及有关蛋白的抗原性等重要特性后，构建了HA抗原表位重组表达质粒pET-32a(+)-HA。经测试，该重组质粒在1 mmol/L IPTG诱导剂作用下诱导过夜，能在大肠杆菌Rosetta-gami B (DE3)中高效表达，并得到48.1 kD大小的目的重组表达蛋白。重组蛋白用6×His-tagged protein纯化试剂盒纯化后，与福氏佐剂等量混合制备成抗原，以200 μg/鸡的剂量皮下注射2月龄SPF鸡3次，采血分离血清。Western-Blot试验结果表明，该重组表达蛋白能分别与所制备的高免鸡血清及H5N1亚型AIV阳性血清发生特异性反应，在硝酸纤维素膜上出现特异性杂交带。说明本试验研究的HA抗原重组表达蛋白具有良好的免疫原性和反应原性，保留了HA蛋白的抗原活性，提示该重组蛋白在H5亚型AIV的防治技术研究中具有重要的实际应用价值。
关键词
禽流感病毒( AIV)；H5N1亚型；抗原表位；表达
