圣罗勒和刺罂粟叶的热水提取物在鸡模型中的免疫调节影响

Puneet Varshney Puneet Varshney; Sandeep Kumar Dash Sandeep Kumar Dash; Anjana Goel Anjana Goel; Ashok Kumar Bhatia Ashok Kumar Bhatia

研究报告/Research Report

圣罗勒和刺罂粟叶的热水提取物在鸡模型中的免疫调节影响

Puneet Varshney

, Sandeep Kumar Dash

, Anjana Goel

, Ashok Kumar Bhatia

Department of Microbiology and Immunology, College of Veterinary Science and Animal Husbandry, DUVASU, Mathura - 281001, UP, India

作者

通讯作者
植物药与药理学杂志, 2013 年, 第 2 卷, 第 10 篇 doi: 10.5376/jpmp.cn.2013.02.0010
收稿日期: 2013年05月15日接受日期: 2013年05月23日发表日期: 2013年05月27日

推荐引用：

引用格式(中文)：

Puneet等, 2012, 圣罗勒和刺罂粟叶的热水提取物在鸡模型中的免疫调节影响, 植物药与药理学杂志(online) Vol.2 No.10 pp.1-5 (doi: 10.5376/jpmp.cn.2013.02.0010)

引用格式(英文)：

Arvind et al., 2012, Modulatory Effects of Hot Aqueous Extract of Ocimum sanctum and Argemone mexicana Leaves in Chicken Model, Zhiwuyao Yu Yaolixue Zazhi (online) Vol.2 No.10 pp.1-5 (doi: 10.5376/jpmp.cn.2013.02.0010)

摘要

本研究的目的是研究圣罗勒和刺罂粟叶的提取物在鸡模型中的免疫调节影响。用250毫克/公斤口服剂量的圣罗勒和刺罂粟叶对无毒的鸡和实验鸡饲做对比试验。S.鼠伤寒沙门氏菌O抗原的体液免疫应答通过定量免疫鸡血清抗体水平通过ELISA试验测定。在对照组比较中喂养的鸡在OS抗体滴度显著升高。抗体滴度在有操作系统的血清样品和喂养的鸡(5 333.33±674.62)和(4 266.67±674.62)，而对照组为(3 733.33±533.33)。这项研究表明在这两种植物的提取物能增强的抗体水平，可以作为一种体液免疫刺激。细胞介导的免疫反应(CMI)是由微分淋巴细胞计数检测(DLC)和DNCB森西敏过敏试验。DLC透露增加淋巴细胞计数在圣罗勒喂养组和降低淋巴细胞计数是刺罂粟叶喂养组与对照组相比。DNCB试验表明在24小时的间隔组控制内圣罗勒喂养组和刺罂粟叶喂养组分别为皮肤厚度减少34.02%，皮肤厚度增加29.89%相比。本研究表明，圣罗勒和刺罂粟叶的热水提取物对细胞抑制的影响具有刺激作用。

关键词

刺罂粟叶；圣罗勒；热水提取物；体液免疫；细胞免疫；CMI；DNCB

有几种疾病，这是由于无论是体液或细胞介导的或这两种类型的反应的免疫抑制。往往在这种情况下，化学药物不能恢复正常功能NS。在这种情况下，由药用植物或他们的产品的免疫系统的调制可能是一种可能的替代治疗方法。世界卫生组织(WHO)已开始给予强调发展和使用草药产品的世界人口的利益，在观看化学药物的局限性和不良影响(Lee, 2004)。环保型和非危险性质对人类和动物的草药，没有残留的影响，最低的耐药性和副作用的情况下，进一步灌输草药的兴趣。

这些植物圣罗勒在许多亚洲本土的医学体系中占有重要地位，非洲和南美洲国家。在印度，我的传统制度的实践者药用于治疗各种疾病和圣地。从过去的二十年中，证明圣罗勒在现代医学治疗的科学依据，一些研究人员(Sood et al., 2006; Bhartiya et al., 2006; Goel et al., 2010)已经开始探索这种植物的药理作用，发现这些提取物对免疫应答的调节的调节作用亭因子。

除了这些行之有效的药材，有一些杂草如墨西哥众所周知的毒性可能有生物活动有益于动物王国包括鸟类(Kumar, 2006)。刺罂粟叶亚种可以归结为各种疾病，疥疮，皮肤瘙痒，湿疹和牛皮癣，疾病受损或有缺陷的细胞介导的免疫和用于白内障和红眼的治疗 (Oudhia, 2001, Gupta, 2004, Kumar, 2006, Goel et al., 2008)。

1结果

1.1无毒剂量的测定

众所周知，刺罂粟叶亚种的种子，含有有毒物质，叫做血根碱在人类和动物消费产生水肿。然而，在我们的研究中，水提取物的制备M A 刺罂粟叶亚种墨西哥叶、GC-MS、HPTLC叶粉透露血根碱化合物的情况下。所有三个剂量的操作系统是安全无毒无不良临床表现观察任何鸟类。所有的鸟显然是正常和健康的。没有对血液学参数的不利影响被发现(数据未显示)。体液和CMI系统是剂量反应研究250毫克/公斤，被使用，因为它是理想的。

1.2体液免疫反应对S.鼠伤寒沙门氏菌O抗原

在实验和控制对S.鼠伤寒沙门氏菌O抗原组采用间接伊莉莎估计鸡抗体滴度。免疫前抗体滴度在所有三EE组类似，从933.33±133.33到933.33±458.12。第一免疫后第七天血清圣罗勒和刺罂粟叶亚种提取收集显示抗体效价上升到2800±400和分别为434.1和2266.67。抗体效价进一步上升至5333.33±674.62和4266.67±674.62分别在圣罗勒和刺罂粟叶亚种喂养组测量时，在第七天之后第二免疫化。在抗体滴度显着上升在圣罗勒和刺罂粟叶亚种鸡与对照组相比。抗体滴度的平均值在表1和图1中给出。表1体液免疫鸡对沙门氏菌血清型鼠伤寒沙门氏菌O抗原。

表 1 体液免疫反应在反对美国鸡血清型沙门氏菌感染“O”抗原

图 1 使用鼠伤寒沙门氏菌O抗原在美联储和饥饿组线图

1.3细胞免疫(CMI)鸡用DNCB反应

研究操作系统的作用是有叶细胞介导的免疫反应，在体内试验来评估迟发型超敏反应(DTH)采用DNCB作为鸡的反应过敏原。意味着鸡实验皮肤厚度值(OS，是美联储)组和对照组在24 h、48 h和72 h后挑战DNCB在表2和图2给出了。在关系对照组饲喂24 h时，对照组的皮肤厚度明显高于对照组的29.89%，而对照组的34.02%的抑制率为24皮肤厚度测量时，在48小时和72小时，操作系统喂养的鸡群保持较高的22.98%和8.10%的比较，以控制。在我喂养组情况有全面抑制SK在厚度。有明显的细胞介导的免疫反应，但显示抑制细胞介导的免疫反应。

表 2 不同时间间隔控制、操作系统和喂饲组鸡皮肤厚度的平均值

图 2 圣罗勒和刺罂粟叶喂养组对皮肤厚度影响的差异图

2探讨

免疫反应有OS是叶片通过测定体液和细胞介导的免疫反应评价。许多工人(Godhwani et al., 1988 and Mediratta et al., 2002)也研究操作系统的影响，发现免疫细胞刺激免疫细胞。Babu等人(2001)报道，免疫调节作用主要是关注与造血细胞的参与和lymphoiD组织。体液免疫反应进行定量测定抗体的间接ELISA方法S.鼠伤寒沙门氏菌O抗原，结果与对照组相比(无鸡)。据观察，在有操作系统的血清抗体滴度和我喂养的鸡均较高(5333.33±674.62)和(4266.67±分别674.62)，而对照组有3733.33±饥饿533.33抗体滴度(表1和图1)。这表明，与对照组相比，系统的抗体水平分别提高了14.28%和42.85%，作为体液免疫有效的兴奋剂。这些结果是可重复的和一致的。早些时候，库马尔(2006)也观察到类似的结果，使用鼠伤寒沙门氏菌抗原在兔。Sadekar等人(1998)也表明提高OS的抗体反应叶喂养的鸟有IBD病毒感染。真理(2004)报道的有效作用，操作系统在提高对细菌和病毒感染的免疫系统功能。lombal等人(2004)观察到的特异性和非特异性的基于OS的免疫反应，发现叶提取物刺激抗体反应。我们的研究结果与他们的发现相似sinister(Latin=left)(拉丁语)左边(的)，左派(的)；

发现有这些植物的叶片的影响对细胞介导的免疫反应过敏性皮肤反应采用DNCB为过敏原。Ocimum圣地组有94.73%皱纹皮肤的厚度而在Argemone墨西哥治疗49.23%组与对照组相比均增加77.6%增加24小时。分析显示增加(29.82%，22.98%和8.10%)在操作系统美联储(- 2.70%，- 13.79%和- 34.02%)在上午喂鸡相比，对照组分别为24，48和72小时后(表2和图2)。总体结果了：目前的研究表明，有操作系统有刺激影响，是研究鸡的抑制作用。研究表明大水提取物抑制T淋巴细胞增殖的影响墨西哥的钱。最近Goel等人(2010)观察罗勒油对体液免疫和细胞介导的免疫刺激作用。通过增加抗体滴度AGA观察体液免疫应答研究院美国鼠伤寒沙门氏菌O抗原和免疫过敏测试皮肤厚度显著增加。Argemone墨西哥对体液免疫反应和抑制的刺激作用在CMI抑菌效果也Goel等人报道(2008)。

Mediratta等人(2002)研究了OS籽油对应激和非应激动物发现OS调制的体液免疫和细胞介导的免疫反应，并认为这马的影响Y是由于GABA能通路调解。在我们的研究中，发现有对免疫系统的两个武器的刺激作用，而有抗体刺激的反应，但引起的在CMI反应的抑制。这项研究表明，操作系统可用于对细菌，病毒感染，以及鸡具有免疫抑制。虽然有我的可用于治疗疾病E异常升高的细胞介导的免疫反应(Gupta, 2004; Kumar, 2006; Goel et al., 2008)。Mukherjee等人(2005)报道，操作系统具有一定的生物活性的免疫刺激玉米叶美联储操作系统对实验大鼠的实验研究。

这项研究得出的结论是，在目前的时间，当我们面对现代医学的局限性在应对病鸡因免疫失调，植物疗法提供BY的阿育吠陀医学和其他传统医学系统似乎是解决方案的潜力。结果表明：罗勒油、蓟罂粟调节免疫反应和显示有前途的治疗价值。

3材料和方法

3.1热水提取物(有)的制备

HAE OS /是用索氏提取器按协议通过Goel等人描述的准备(2008)。悬浮液过滤棉布然后什么人1号滤纸和DRIED在冻干机在真空下。百分比率为14% ~ 16%(W / W)为OS和16% ~ 19%(W / W)为AM在干燥的起始物料。

3.2实验鸟

标准病原体免费一日龄雏鸡(av。重量30 ~ 35 GM)是由Uday孵化场购买和饲养在农场，Mathura，DUVASU，Mathura。所有的鸟都被安置在标准的控制之下条件。采取了预防措施，以防止环境污染。在每个实验心理组，个别鸟类识别采用翼标签。七日龄雏鸡被用于实验。所有这些实验是通过“实验动物伦理委员会”(原子能委员会)，并在他们的指导下进行的研究。每实验组6只/对照组用。

3.4体液免疫应答

3.4.1 serovartyphimurium沙门氏菌O抗原的制备

S.鼠伤寒沙门氏菌O抗原的制备由Bhatia等人(2003)描述。沙门氏菌血清型鼠伤寒沙门氏菌光滑菌落在脑心浸液琼脂培养基上生长(BHI)硒同时接种于BHI肉汤。接种肉汤培养6 ~ 8小时在37ºC于3 000 rpm离心20分钟，弃去上清液，用生理盐水冲洗煮100ºC 2.30小时热灭活的沙门氏菌血清型鼠伤寒沙门氏菌培养为O抗原的体液免疫反应(HIR)测定鸡。

3.4.2免疫鸡

三组即；控制，圣罗勒和刺罂粟叶亚种已经喂养，每组6只鸡龄7天了。操作系统和上午组鸡口服250毫克/公斤体重的有操作系统/上午分别为21天。对照组给予口服三组蒸馏水(安慰剂组)21天。在第二十二天和七天第一个剂量间隔第二剂量的沙门氏菌血清型鼠伤寒沙门氏菌O抗原皮下给所有群体如表3所示的鸡。在接种前第七天，接种疫苗后，从各鸡群中采集血清样本第二免疫间接ELISA试验测定对沙门氏菌的O抗原抗体滴度首次免疫后7天。

表 3 免疫接种程序表

3.4.3体液免疫反应的抗体效价用间接伊莉莎测量：

沙门氏菌O抗原包被聚苯乙烯微量滴定板(威尔斯Nunc)在4â„ƒ孵育过夜。三洗涤用PBS(PBS pH 7.2、0.01)含0.05%吐温-20(pBS-T)，阻断了1%牛血清白蛋白溶于PBS，1个小时37â„ƒ½。连续稀释的血清样品(1:100至1:10240)从1到11的第十二孔微量滴定板分别作为阴性对照。兔抗鸡免疫球蛋白–Y(IgY)结合HRP(辣根过氧化物酶，1:4000)和底物TMB(1:20)连续添加到所有的威尔斯啊F微板，显色后，加入50µl 1M硫酸每15分钟停止。的光密度测定在450到570纳米，并与对照组相比。

3.5细胞介导的免疫反应在鸡用DNCB

本研究的目的是进行评估有操作系统的效果，是叶2，4-二硝基氯苯(DNCB)致敏鸡的方法是由蒂瓦里和戈尔描述(1985)。我本实验模型作为抗原。每组6只鸡(7日龄)，每组三只。第二组和第三组口服250毫克/公斤体重的操作系统和上午离开S提取物分别为21天。I组作为对照组和安慰剂(TDW)口服21天。

在后第二十二天喂0.25毫升的二等分(10毫克/毫升)应用下降对腹部羽毛的地区联合国左侧下降到个别鸟每组干吹。车辆的乐(丙酮)单独应用于腹部右侧。经过7天的挑战剂量(1毫克/毫升)对DNCB于相同的测试方和车辆本身对腹部右侧(Renu et al.，2003)。通过varnier卡尺的挑战前，24 h、48 h测定皮肤厚度，72小时后的挑战。在C之前减去测量厚度的厚度的差异计算从那后挑战挑战。

作者贡献

所有作者对这项研究都做出了同样的贡献。所有的作者阅读并批准了最终版本的手稿。

致谢

作者感谢大学当局提供必要的设施，开展这项研究工作。

参考文献

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