研究报告/Research Article
枳两个GRAS基因cDNA全长的克隆及其亚细胞定位分析 
李阿英 
,
刘洪 ,
李晓颖 ,
郭磊 ,
宋长年 
,
刘洪 ,
李晓颖 ,
郭磊 ,
宋长年
南京农业大学园艺学院，南京210095
作者 通讯作者
植物药与药理学杂志, 2012 年, 第 1卷, 第 4 篇
收稿日期: 2012年06月05日 接受日期: 2012年06月17日 发表日期: 2012年06月28日
作者 通讯作者
植物药与药理学杂志, 2012 年, 第 1卷, 第 4 篇
收稿日期: 2012年06月05日 接受日期: 2012年06月17日 发表日期: 2012年06月28日
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本文首次发表在 《基因组学与应用生物学》(2012, Vol.31, No.3)上。现依据版权所有人授权的许可协议，采用 Creative Commons Attribution License,协议对其进行授权，再次发表与传播。只要对原作有恰当的引用, 版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。
推荐引用：
引用格式(中文)：
宋长年等, 2012, 枳两个GRAS基因cDNA全长的克隆及其亚细胞定位分析, 基因组学与应用生物学, 31 (3): 240-248 (doi: 10.3969/gab.031.000240)
引用格式(英文)：
Li et al., 2012, Cloning and Subcellular Localization Analysis of Two GRAS Genes from Poncirus trifoliata, Genomics and Applied Biology, 31 (3): 240-248 (doi: 10.3969/gab.031.000240)
宋长年等, 2012, 枳两个GRAS基因cDNA全长的克隆及其亚细胞定位分析, 基因组学与应用生物学, 31 (3): 240-248 (doi: 10.3969/gab.031.000240)
引用格式(英文)：
Li et al., 2012, Cloning and Subcellular Localization Analysis of Two GRAS Genes from Poncirus trifoliata, Genomics and Applied Biology, 31 (3): 240-248 (doi: 10.3969/gab.031.000240)
摘 要
利用生物信息学方法以拟南芥SCL6和杨树GRAS cDNA 序列作为模板，对柑橘EST数据库进行同源检索筛选出柑橘SCL6和GRAS基因的cDNA序列，并以枳(Poncirus trifoliata (L.) Raf.)花cDNA为模板，根据以上cDNA序列设计5’末端和3’末端扩增的特异引物，利用5’RACE和3’RACE技术，分别获得该基因的5’和3’末端，序列拼接后获得枳的SCL6和GRAS cDNA全长。分别命名Pt-SCL6和Pt-GRAS，大小分别是2,668 bp 和1,911 bp，在GenBank的登录号分别是GQ505957和GU072592，其分别编码706和636个氨基酸全长。生物信息学分析表明Pt-SCL6和Pt-GRAS的cDNA序列中分别有microRNA171 (miR171) 和miR1446的识别位点，其与其它植物的GRAS一样有着高度保守的序列即GRAS结构域。构建Pt-SCL6和Pt-GRAS亚细胞定位载体35S-GW-GFP- GQ505957/ GU072592，基因枪转化洋葱表皮细胞，暗培养24 h后激光共聚焦显微镜下观察。亚细胞定位结果表明Pt-SCL6和Pt-GRAS均定位于细胞膜中。转录因子Pt-SCL6和Pt-GRAS表现出在细胞膜区域定位的现象。
关键词
枳；Pt-SCL6和Pt-GRAS；基因克隆； 亚细胞定位
植物药与药理学杂志
• 第 1 卷
