2仲恺农业工程学院生命科学学院, 广州, 510225;
3华南农业大学生命科学学院, 广州, 510642
作者 通讯作者
计算分子生物学, 2013 年, 第 2卷, 第 2 篇
收稿日期: 2013年02月21日 接受日期: 2013年02月21日 发表日期: 2013年02月21日
引用格式(中文):
杨加伟, 周玲艳, 庄楚雄, 2013, 水稻 Osε-cop1 基因的原核表达及多克隆抗体制备, 基因组学与应用生物学, 32(4): 497-502
引用格式(英文):
Yang J.W., Zhou L.Y., and Zhuang C.X., 2013, Prokaryotic Expression and Polyclonal Antibody Preparation of Osε-cop1 in Rice (Oryza sativa L.), Jiyinzuxue Yu Yingyong Shengwuxue (Genomics and Applied Biology), 32(4): 497-502
ε-COP 蛋白是真核生物分泌途径中 COPⅠ有被小泡的一个亚基。本研究利用 PCR 技术扩增水稻 ε-cop 基因(Osε-cop1)的 ORF(开放阅读框),并克隆到原核表达载体 pET-23d 上,将表达载体 pET-Osε-cop1 转入大肠杆菌 BL21 (DE3),以 1.0 mmol/L 的 IPTG (isopropyl β-D-thiogalactoside)诱导表达重组蛋白,然后以 重组蛋白作为抗原免疫家兔,制备多克隆抗体。SDS-PAGE 电泳分析结果表明,成功诱导表达了分子量约为 35 kD 的重组蛋白,Western blot 检测表明,免疫家兔的抗血清与水稻幼穗总蛋白杂交信号较好。Osε-COP1 抗体的制备有助于研究该基因及 COPI 小泡在水稻中的功能。