李飞^1,2 , 许厚强² , 陈伟² , 陈祥² , 刘敏^1,2 , 桓聪聪²

1贵州大学生命科学学院, 贵阳, 550025;
2高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室, 贵州大学动物科学学院, 贵阳, 550025
作者    通讯作者
计算分子生物学, 2013 年, 第 2卷, 第 4 篇   
收稿日期: 2013年04月21日    接受日期: 2013年04月21日    发表日期: 2013年04月21日

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推荐引用：

引用格式(中文):

李飞, 许厚强, 陈伟, 陈祥, 刘敏, 桓聪聪, 2013, 关岭牛MyoDⅠ基因启动子报告质粒的构建及活性验证, 基因组学与应用生物学, 32(4): 459-466

引用格式(英文):

Li F., Xu H.Q., Chen W., Chen X., Liu M., and Huan C.C., 2013, Verification of Activity and Construction of the Report Plasmid of MyoDⅠGene Promoter in Guanling Cattle, Jiyinzuxue Yu Yingyong Shengwuxue (Genomics and Applied Biology), 32(4): 459-466

为了克隆关岭牛 MyoDⅠ基因启动子并验证其启动活性，根据 GenBank 中牛的 MyoDⅠ基因序列设计 PCR 引物，用 PCR 技术扩增牛 MyoDⅠ基因的启动子，构建重组克隆载体 pUCmT-MyoDⅠ；并通过 PCR 扩增、 限制性酶切、测序及生物信息学分析对阳性克隆进行鉴定；构建报告质粒 pGL3-MyoDⅠ，并将其转染小鼠 C2C12、3T3-L1 细胞系，检测其 24 h 后的双荧光素酶活性。实验结果获得了关岭牛 MyoDⅠ基因启动子，其序列 长度为 993 bp，并成功构建了 MyoDⅠ启动子报告质粒；双荧光素酶活性检测表明 pGL3-MyoDⅠ在小鼠 C2C12 细胞中的表达是 pGL3 空载体 40.65 倍，在小鼠 3T3-L1 细胞中的表达是空载体的 1.13 倍，MyoDⅠ启动子在小 鼠 C2C12 细胞中的表达高于 3T3-L1 细胞(** p<0.01)。结果表明关岭牛 MyoDⅠ基因启动子具有启动活性，在小 鼠骨骼肌细胞中特异性表达。

MyoDⅠ基因；启动子；荧光素酶；C2C12；3T3-L1