李健^1,2 , 蒋昌华^1,2 , 张亚利^1,2 , 刘炤^1,2 , 赵晓峰^1,2 , 胡永红^1,2

1.上海植物园, 上海, 200231
2.上海城市植物资源开发应用工程技术研究中心, 上海, 200231
作者    通讯作者
《分子植物育种》网络版, 2011 年, 第 9卷, 第 23 篇   doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0023
收稿日期: 2010年10月20日    接受日期: 2011年02月18日    发表日期: 2011年03月01日

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推荐引用：

李健等, 2011, 金花茶SRAP-PCR反应体系的优化与确立, 分子植物育种 Vol.9 No.23 (doi: 10.5376/mpb.cn.2011.09.0023)

本研究采用L₁₆ (4⁵)正交实验设计,对SRAP-PCR反应体系中Mg²⁺、dNTPs和引物浓度以及Taq DNA聚合酶和模板DNA用量等5个因素进行了优化,并确立了适合金花茶(Camellia nitidissima) SRAP-PCR的反应体系。金花茶的SRAP-PCR最佳反应体系为:反应体系总体积20 μL，含1.50 mmol/L Mg²⁺、0.20 μmol/L dNTPs、0.30 μmol/L引物、75 ng模板DNA、1.00 U Taq DNA聚合酶及1×PCR Buffer。各因素对金花茶基因组DNA SRAP-PCR扩增结果的影响程度不同,其中Mg²⁺浓度的影响最大,dNTPs浓度的影响最小。通过对优化的SRAP-PCR反应体系进行验证,获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱,表明所确立的金花茶SRAP-PCR反应体系稳定可靠。

金花茶；SRAP-PCR；正交实验设计；反应体系优化